Estudio in vitro del efecto citotóxico y antioxidante de un agua hidrogenada sobre líneas celulares humanas.
El propósito de este estudio fue utilizar dos modelos de células humanas para determinar los posibles efectos de la presencia de agua electrolizada y su hidrógeno sobre la viabilidad celular y la actividad antioxidante.
Para estudiar los efectos del agua electrolizada, utilizamos líneas celulares sanas, como ARPE-19 (ATCC®CRL-2302TM, células epiteliales pigmentarias de la retina humana) y líneas de células tumorales, como las células HeLa (ATCC®CCL-2TM, células glandulares humanas Células epiteliales cancerosas, especialmente cáncer de cuello uterino).
Cultivos celulares
Cada línea celular utilizada en el estudio se cultivó y se mantuvo en un medio de crecimiento apropiado. Guárdelos en una incubadora a 37 ° C con una humedad del 5% de dióxido de carbono.
Ensayo de viabilidad celular
Se siembra cada línea celular en una placa de microtitulación de 96 pocillos para asegurar que la densidad celular aumente exponencialmente sin llegar a la saturación. La densidad de las células ARPE-19 es de 7.5 · 104 células / cm2 y HeLa es de 1.5 104 células / cm2. Se incuban durante 24 horas a 37 ° C para permitir que se adhiera a la superficie del pozo. Para cada tiempo de estudio (0, 24, 48 y 72 horas), cada línea celular se sembró en una microplaca diferente.
Ensayo de la actividad antioxidante celular (CAA)
Se sembraron células ARPE-19 y HeLa en una placa de microvaloración de 96 pocillos y se incubaron durante 72 horas para el tratamiento agudo. Para el tratamiento crónico, el medio se cambia diariamente y las células se tratan con medio 0 o medio 3 durante 72 horas.
RESULTADOS
Estudios de viabilidad y proliferación celular
Las células ARPE-19 y HeLa se cultivaron en condiciones óptimas y se controlaron mediante microscopio óptico para evaluar su evolución e idoneidad para los experimentos.
Actividad Antioxidante Celular (CAA)
Para determinar la generación de radicales libres en las células, las células se trataron con diacetato de 2 ‘, 7’-diclorodihidrofluoresceína (DCFH-DA) apolar y no fluorescente. El compuesto sufre una reacción de desacetilación por esterasa citoplásmica para formar una diclorodihidrofluoresceína polar no fluorescente (DCFH), que reacciona con los radicales libres (ROS) para producir un derivado fluorescente de diclorofluoresceína.
En las células ARPE-19 y HeLa, la exposición al inductor de radicales peroxi específico AAPH (Tabla 1) confirmó su actividad antioxidante y protección contra el hidrógeno. En comparación con ARPE-19, las células tumorales HeLa tienen un CAA basal más alto debido a su metabolismo basal más alto, lo que significa que se requiere una mayor protección intracelular. En ambas líneas celulares, la adición aguda de H2 al medio aumentó el CAA de una manera dependiente de la dosis, y el aumento observado en las células HeLa fue mayor que el observado en ARPE. Aunque cuantitativamente hablando, las células HeLa tienen un CAA más alto, un análisis relativo con respecto a la línea de base mostró que el aumento en las células ARPE-19 (> 6,7) fue mayor que el de HeLa (> 4,1).
En comparación con el tratamiento agudo, este comportamiento diferente del tratamiento crónico puede explicarse por dos razones. El primero puede estar relacionado con el hecho de que el uso prolongado de H2 puede inducir un aumento de los sistemas antioxidantes celulares a nivel de los sistemas enzimáticos (SOD, GR, GPx, Cat, etc.) y los sistemas químicos (glutatión, etc.). El no aumento observado en las células tumorales puede explicarse por la falta comprobada de ciertos componentes básicos del sistema antioxidante celular, como GPx, que previene la mejora. Para otros ingredientes activos, se han descrito comportamientos similares entre células sanas y células tumorales.
