Filosofía & Equipo de trabajo
Ionfilter
Azterketa in vitro: ur hidrogenatu batek giza zelula-lerroetan duen efektu zitotoxiko eta antioxidatzailea
Azterketa honen helburua giza zelulen bi eredu erabiltzea izan zen, ur elektrolizatuaren eta haren hidrogenoaren presentziak zelulen bideragarritasunean eta jarduera antioxidatzailean izan ditzakeen ondorioak zehazteko.
Ur elektrolizatuaren efektuak aztertzeko, zelula-lerro osasuntsuak erabili ziren, hala nola ARPE-19 zelulak, eta baita tumore-zelulen lerroak ere, hala nola HeLa zelulak.
Zelula-kultiboak
Azterketan erabilitako zelula-lerro bakoitza hazkuntza-ingurune egoki batean kultibatu eta mantendu zen.
37 °C-ko inkubagailu batean gorde ziren, karbono dioxidoaren %5eko hezetasunarekin.
Zelula-bideragarritasunaren saiakuntza
Zelula-lerro bakoitza 96 putzuko mikrotitulazio-plaka batean ereiten da, zelula-dentsitatea esponentzialki handitu dadin, saturaziora iritsi gabe.
ARPE-19 zelulen dentsitatea 7,5 · 10⁴ zelula/cm² da, eta HeLa zelulena 1,5 · 10⁴ zelula/cm². 24 orduz inkubatzen dira 37 °C-an, putzuaren gainazalari atxiki daitezen.
Azterketa-denbora bakoitzerako (0, 24, 48 eta 72 ordu), zelula-lerro bakoitza mikroplaka desberdin batean erein zen.
Zelulen jarduera antioxidatzailearen saiakuntza (CAA)
ARPE-19 eta HeLa zelulak 96 putzuko mikrobalorazio-plaka batean erein ziren, eta 72 orduz inkubatu ziren tratamendu akuturako.
Tratamendu kronikorako, ingurunea egunero aldatzen da, eta zelulak 0 ingurunearekin edo 3 ingurunearekin tratatzen dira 72 orduz.
Emaitzak
Zelula-bideragarritasunaren eta zelula-proliferazioaren azterketak
ARPE-19 eta HeLa zelulak baldintza egokietan kultibatu ziren, eta mikroskopio optiko bidez kontrolatu ziren, haien bilakaera eta esperimentuetarako egokitasuna ebaluatzeko.
Zelular Antioxidatzaile Jarduera (CAA)
Erradikal askeen sorrera zeluletan zehazteko, zelulak 2’,7’-diklorodihidrofluoreszeina diacetatoarekin (DCFH-DA) tratatu ziren. Konposatu hori apolarra eta ez-fluoreszentea da.
Konposatuak desazetilazio-erreakzio bat jasaten du esterasa zitoplasmatikoaren bidez, diklorodihidrofluoreszeina (DCFH) polar eta ez-fluoreszentea sortzeko. Ondoren, DCFH-k erradikal askeekin (ROS) erreakzionatzen du, eta diklorofluoreszeinaren deribatu fluoreszentea sortzen du.
ARPE-19 eta HeLa zeluletan, AAPH peroxi-erradikalen induktore espezifikoarekiko esposizioak haren jarduera antioxidatzailea eta hidrogenoaren aurkako babesa baieztatu zituen.
ARPE-19 zelulekin alderatuta, HeLa tumore-zelulek CAA basal handiagoa dute, metabolismo basal handiagoa dutelako. Horrek esan nahi du zelula barruko babes handiagoa behar dutela.
Bi zelula-lerroetan, H2-ren gehikuntza akutuak CAA handitu zuen dosiaren araberako moduan, eta HeLa zeluletan ikusitako igoera ARPE-19 zeluletan ikusitakoa baino handiagoa izan zen.
Hala ere, ikuspegi kuantitatibotik HeLa zelulek CAA handiagoa badute ere, oinarrizko balioarekiko egindako analisi erlatiboak erakutsi zuen ARPE-19 zeluletan igoera handiagoa izan zela (> 6,7), HeLa zeluletan baino (> 4,1).
Tratamendu akutuan ikusitakoarekin alderatuta, tratamendu kronikoaren portaera desberdin hori bi arrazoirengatik azal daiteke.
Lehenengoa izan daiteke H2-ren erabilera luzatuak zelulen sistema antioxidatzaileen igoera eragin dezakeela, bai sistema entzimatikoen mailan (SOD, GR, GPx, Cat, etab.), bai sistema kimikoen mailan (glutationa, etab.).
Tumore-zeluletan igoerarik ez ikustea zelulen sistema antioxidatzailearen oinarrizko osagai batzuen gabezia egiaztatuarekin azal daiteke, hala nola GPx-ren gabeziagatik, horrek hobekuntza eragozten baitu.
Beste osagai aktibo batzuetan ere antzeko portaerak deskribatu dira zelula osasuntsuen eta tumore-zelulen artean.
